简介

        miRNA功能研究策略

　　   功能获得性研究（gain-of-function）：可化学合成miRNA mimic、 miRNA agomir；或利用现成的miRNA前体过表达载体，也可根据需要进行定制。

　　   功能缺失性研究（loss-of-function）：可化学合成miRNA inhibitor、miRNA antagomir、或利用现成的miRNA抑制剂表达载体，也可根据需要进行定制。

1、miRNA过表达载体

　　现货提供1700个人类、834个小鼠miRNA前体的各种表达载体。同时定制各种miRNA前体表达载体。

　　采用基于猫免疫缺陷病慢病毒系统的载体骨架，构建了miRNA前体表达克隆。RNA聚合酶III型的H1启动子驱动转录前体miRNA的茎环前体（大约有150核苷酸长度）。 随后通过RNAi的酶系加工生成成熟的miRNA。在CMV启动子和双顺反子驱动下，共表达的报告基因eGFP和新霉素/嘌呤霉素筛选基因，可作为监测miRNA表达、转染和转化效率的参考标准。



   


　　特点：miRNA表达框已完全测序确证并经过优化，有利于前体miRNA在细胞中的表达和成熟； 非病毒和病毒表达载体，可转染普通细胞和难转染、未分化细胞，可进行瞬时或稳定表达；载体中包含的eGFP标签可以监测载体的转染或感染效率。




2、miRNA mimic库和 miRNA agomir库

　　针对成熟miRNA序列特殊设计，运用化学方法合成的双链RNA，能模拟细胞中内源性成熟miRNA的高水平表达，以增强内源性miRNA的调控作用，进行功能获得性(gain-of-function)研究。只需直接转染进入细胞或动物，可瞬时/稳定表达，可检测功能变化，快速，方便。

　　现货提供miRBase 21.0中人、小鼠、大鼠的 miRNA mimic/ miRNA agomir，并不断补充更新，其他物种需要定制。




3、miRNA抑制剂表达载体

　　现货提供miRBase 21.0 数据库中全部人、小鼠和大鼠性抑制剂表达载体。同时定制各种miRNA抑制剂表达载体。






　　特点：提供基于慢病毒或非病毒载体的miRNA抑制剂表达克隆 ，经过miRNA的特异严格的实验测试，保证能在大多数哺乳动物细胞中高水平表达，可瞬时或者稳定抑制miRNA，带有荧光蛋白报告基因便于转染后的细胞筛选。




4、miRNA inhibitor库和miRNA antagomir库


       miRNA inhibitor/antagomir是针对成熟miRNA序列，化学合成的miRNA抑制剂，通过特异性地与成熟miRNA分子结合而抑制其作用，可以削弱细胞中miRNA导致的基因沉默效应，进行短期或长期的miRNA功能缺失性(loss-of-function)研究。miRNA inhibitor只需用转染试剂包裹即可转染进入细胞；miRNA antagomir直接转入细胞或注射动物，持续作用6周。

　　现货提供miRBase 21.0数据库中人、小鼠、大鼠的所有miRNA inhibitor/ miRNA antagomir，并不断补充更新，其他物种的miRNA inhibitor/ miRNA antagomir需定制。




5、 miRNA 3' UTR 靶标克隆


       miRNA通过碱基互补配对的方式识别靶基因的3’UTR区，并根据互补程度的不同指导沉默复合体降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻译。因此，可以将目的基因的3’UTR区域构建到含luciferase的报告基因上，通过比较miRNA过表达或inhibitor 与报告基因作用检测荧光值的变化，判断miRNA对靶基因的作用。再通过对3’ UTR区进行定点突变的方法进一步确定miRNA与靶基因3’UTR的作用位点。

　　现货提供人类23000个、小鼠19000个、大鼠8000个编码基因的3’UTR区报告基因载体，其他物种和基因可定制。原理图：