简介
荧光定量PCR对初始模板定量有两种策略：相对定量法和绝对定量法。
绝对定量是用已知浓度的标准品绘制标准曲线来推算未知样品的量。将标准品稀释至不同浓度，作为模板进行PCR反应。以标准品拷贝数的对数值为横坐标，以测得的CT值为纵坐标，绘制标准曲线，对未知样品进行定量时，根据未知样品的CT值，即可在标准曲线中得到样品的拷贝数。
标准曲线制作
1、绝对定量标准品
标准品可以是含有目的基因的线性化的质粒DNA，也可以是比扩增片段长的纯化后的PCR产物，当然也可以是基因组DNA，甚至cDNA，但前提是所有的作为标准品的核酸都必须保证稳定。测定初始标准品的浓度，再将标准品依次进行10倍稀释，达到5-8个不同标准品浓度。
2、定量PCR实验：必须用与扩增目的基因相同的引物进行扩增，并且扩增效率相同。
3、制作标准曲线：以标准品拷贝数的对数值为横坐标，以测得的CT值为纵坐标，绘制标准曲线。如下图：
数据分析
将待测样品的CT值，对照标准曲线，即可得出样品中目的基因的拷贝数，再对不同样品进行比较分析。
应用领域
致病微生物的检测、环境样品的检测、荧光定量PCR检测mRNA、miRNA、lncRNA、环状RNA的表达丰度以及不同样品之间DNA拷贝数。
