简介
微生物种类繁多,培养条件复杂。据统计现今只有1%的微生物可以在实验室进行纯种培养。宏基因组学是将环境样品中的微生物群落作为整体进行研究的学科。与其他研究环境群落的方法相比,宏基因组测序具有通量大、产出数据多、更为高效的优势。采用宏基因组测序的方法对微生物群落进行研究,不仅能够获得样本微生物物种的组成和丰度信息,还可以进行功能基因注释,获取样品间基因差异信息。
宏基因组测序是指对环境样品中所有微生物基因组DNA片段化后进行高通量测序,进行序列组装和基因注释,获得部分不可纯培养微生物的基因组序列,分析该环境下所有微生物基因集信息。
通过宏基因组测序,能够解释微生物群落多样性、种群结构、进化关系、功能活性及环境之间的相互协作关系,极大地扩展了微生物学研究范畴。
生物信息分析
1. 原始数据整理、过滤及质量评估
2. 基于物种丰度分析: ♦物种丰度列表 ♦稀释曲线
3. 基于物种丰度分析: ♦丰度分布曲线图 ♦生物多样性指数(α多样性)列表 ♦物种丰度差异性分析列表 ♦多样品物种分布柱图 ♦丰度差异物种聚类分析 ♦PCA图 ♦Krona图
4. 基因丰度列表: ♦提取基因分级注释丰度列表(KO、NOG、subsystem) ♦功能基因列表 ♦生成venn图 ♦基因丰度差异性分析列表 ♦丰度差异基因聚类分析 ♦富集分析(KO)
5. 根据客户需求进行个性化分析
结果展示
1、样品稀释曲线
2、不同样品微生物群落结构差异
3、实验组和对照组丰度差异基因的GO功能分析
4、实验组和对照组丰度差异基因的Pathway分析
5、 全基因组拼接环状图
样品要求
1、样品采集:样品采集条件的一致是最为重要的环节,严格按照采样标准采样,采样后立即封存样品冷冻保存。
2、样品DNA:环境因素异常复杂,许多物质或抑制因子影响后续PCR、测序文库构建和序列测定,常规提取方法不一定适合,建议采用专用试剂盒提取。PE文库DNA浓度≥20 ng/μl,总量≥6 μg(荧光定量),并确保电泳检测无明显RNA条带,基因组条带清晰、完整;基因组DNA完全无降解;提供DNA电泳检测照片,用自封袋密封后随样品一起送样;组织样品﹥1.5 g。
3、样品保存期间切忌反复冻融。
4、送样管务必标清样品编号,管口使用Parafilm膜密封。