服务简介
Western Blot中文一般称为蛋白质印迹。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的从细胞或生物组织样品提出的蛋白进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。
Western Blot与Southern印迹杂交或Northern印迹杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过SDS-page电泳分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素膜NC膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。
服务内容
1、常规SDS-PAGE Western,即1D-Western blot,就是以上介绍的最常用的Western blot。
2、双向电泳Western,即2D-Western blot,这是SDS-page Western的升级方法,将蛋白样品经过2D(双向电泳)分离后,再利用特异抗体进行Western blot。可探索某个抗体能识别哪些蛋白抗原;可考察某个抗体的特异性是否良好;可检测某种特定修饰状态的蛋白的表达水平。
3、IP 或Co-IP Western blot,免疫沉淀(IP)或免疫共沉淀(Co-IP)和Western blot结合是研究蛋白相互作用或蛋白复合物的有力工具。若想鉴定某种蛋白是否和A蛋白相互作用,则可以利用A蛋白的特异蛋白进行免疫共沉淀(Co-IP),将所有与A蛋白相互作用的蛋白混合物富集下来,再混合物进行SDS-page Western,即可验证。
服务结果
A、Western blot 检测的试剂耗材、仪器设备、操作过程。
B、蛋白上样浓度、上样量一份;
C、标记好的曝光胶片、胶片扫描图;
D、各条带灰度分析报告
结果示例
1、SDS-PAGE图片
2、SDS-PAGE Western Blot图片
3、2D-Western blot图片
样品要求
A、对于常规Western blot检测,组织100mg以上、细胞数量10的6次方以上,新鲜或冷冻保存;
B、对于2D Western blot检测,咨询业务员;