在Science（2013年1,3月）的两篇文章，证明Cas9系统能在293T、K562、iPS等多种细胞中，进行有效的靶向酶切，非同源重组（NHEJ）、同源重组（HR）效率在3-25%之间，与TALEN酶切效果相当。文章还证明，多个靶点可以同时进行靶向酶切。这些工作将进一步靶向基因操纵推向高潮，使得多个基因敲除、敲入变得更为简单、高效。虽然目前，大家对该技术的特异性，免疫原性还了解甚少，但是随着研究的不断深入，一定会有很大的改善。在未来的2-3年，动植物育种、干细胞定向分化、遗传疾定点修复等等都将得到迅猛的发展。

　　言行生物拥有成熟高效的CRISPR/Cas9及TALEN基因敲除技术平台，完善的模式生物构建流程平台，完美整合从载体设计、构建、活性鉴定、基因突变动物模型建立等各个环节。现推出小鼠、大鼠、猪、斑马鱼等模式生物基因敲除/敲入技术服务，为客户提供周期短、性价比高的模式生物制备服务。

　　服务类型

1、全身性基因敲除

2、条件性敲除

3、点突变

4、小片段基因敲入

5、双/多基因敲除/敲入

动物制备

技术优势

1、我们已经具有10000多对CRISPR/Cas9系统构建和活性验证的成功经验。

2、我们具有强大的技术支持团队，可以为客户提供免费专业的技术支持。

3、我们已经成功使用CRISPR/Cas9系统为客户提供了数千例成功案例，包括小鼠、大鼠、家蚕、斑马鱼等突变体，至今未曾失败过，我们的服务受到了客户的一致认可。

4、价格低、周期短。

服务流程和周期

具体流程

1、CRISPR/Cas9技术获得的基因敲除鼠，由于是在大鼠或者小鼠的鼠原核受精卵期进行的修饰，获得的F0鼠一般也是杂合子，并且每只FO鼠由于移码突变情况可能不一样，所以每只F0鼠也需要作为一个独立的谱系进行传代；

2、原核显微注射获得测序鉴定阳性的F0代杂合子鼠，F0代杂合子鼠与野生型鼠进行交配，获得测序鉴定阳性的F1代杂合子鼠（可能有多种突变类型的F1）；

3、选择来自同一只F0代鼠，突变类型一致的F1代鼠，达到性成熟后与进行同胞交配，可获得F2代鼠。对交配获得的F2代鼠进行PCR及测序鉴定，理论上， F2代鼠中25%为相同突变型的纯合子鼠，有50%为只有一条染色体突变的杂合子鼠，有25%为野生型鼠。

参考文献

1、RNA-Guided Human Genome Engineering via Cas9 .Science. 2013 Feb 15 339(6121):823-6.

2、Multiplex Genome Engineering Using CRISPR/Cas Systems. Science. 2013 Feb 15 339(6121):819-23.