简介
利用甲基化测序和甲基化芯片技术得到的差异甲基化基因，或者经过参考文献而感兴趣的甲基化基因，都需要进行DNA甲基化验证。言行生物能提供美国Sequenom公司的MassARRAY质谱技术、MSP技术、BSP技术等进行甲基化检测服务。
一、Sequenom MassARRAY技术服务
实验流程和原理
- 将待测DNA经过亚硫酸盐处理，DNA中未甲基化胞嘧啶(C)转变为尿嘧啶(U)，而甲基化修饰的胞嘧啶不变；
- 通过PCR扩增过程引入T7-启动子序列，经T7 DNA聚合酶的体外转录过程得到各样本RNA产物；
经过碱基特异性酶切处理，得到RNA小片段，并用飞行质谱检测每个片段的分子量，最后EpiTYPER程序完成数据的自动化处理并报告每个检测片段的甲基化程度。
在步骤3的体系中，利用Rnase A能够特异性识别并切割RNA中U3端的特性，将RNA片段切割成带有CpG位点的小片段。
使用MassArray飞行质谱系统检测产物。由于同一片段中，只有CpG和CpA之间16Da的分子量差别，即质谱图中两者峰的差距。
特点
1、定量检测覆盖长达600bp 的所有CpG 位点；
2、精度高（5%CV），灵敏度高（可检测低至5% 的甲基化水平）；
3、无需后续验证，可直接发表结果；
4、研究几个到几百个甲基化位点的理想手段
结果展示
1、甲基化程度展示图
2、甲基化程度定量结果
样品量
细胞样品请提供至少2×107个细胞，组织样品请提供至少50mg的组织块或切片，DNA样品请提供5 μg以上。
二、MSP技术服务
原理：甲基化特异性的PCR技术（（methylation-specific PCR, MSP）是在亚硫酸盐处理基因组DNA后，所有未发生甲基化的胞嘧啶（C）被转化为尿嘧啶（U）而甲基化的胞嘧啶则不变，设计两对引物，即一对扩增甲基化DNA链（引物对M），另一对扩增非甲基化DNA链（引物对U），电泳检测引物M和U是否扩增成功，来判断某个基因的甲基化情况。
客户只需提供待测基因和≥2ug的基因组DNA或其他足量的样品。我们进行基因组DNA处理，MSP引物设计合成，PCR扩增，分析结果等，提供实验报告(包括MSP扩增图)。
结果展示
三、BSP技术服务
原理：BSP（Bisulfite Genomic Sequence）技术是在亚硫酸盐处理基因组DNA后，所有未发生甲基化的胞嘧啶（C）被转化为尿嘧啶（U）而甲基化的胞嘧啶则不变，设计BSP引物扩增，此时尿嘧啶（U）全部转化为胸腺嘧啶（T），对PCR产物进行克隆，再挑克隆测序看结果是CG还是TG从而判断该位点是否发生甲基化。
客户只需提供待测基因和≥2ug的基因组DNA或其他足量的样品。我们进行基因组DNA处理，BSP引物设计合成，PCR扩增，将产物克隆测序，分析结果等，提供实验报告(包括BSP产物的测序报告)。
结果展示---序列比对
