利用环状RNA（circRNA）测序和芯片技术筛选到差异表达的circRNA后，往往需要开展gain-of-function（功能获得）研究，就需要过表达circRNA。
circRNA过表达思想主要源于circRNA生物形成机制，已有多篇文章报道circRNA成环机制，目前比较公认的成环机制为circRNA侧翼序列的碱基互补配对，称之为Alu结构（如下图）。
circRNA侧翼结构特征
基于circRNA侧翼Alu序列特征，PCR扩增含侧翼Alu序列的目标DNA序列，随后依据对应限制性内切酶位点进行酶切，进而连接pEGFP-C1载体。连接载体进而转染对应细胞样本，定量PCR检测转染效率。基于divergent primer验证circRNA过表达倍数。
过表达策略：
1. 扩增目标区域包含circRNA侧翼Alu序列或内部碱基互补序列，侧翼上下游1kb处过表达效率更佳；
2. 目标区域扩增基于基因组DNA为模版。
环状RNA（circRNA）由于结构的特殊性，与miroRNA和lncRNA有着很大差异，让研究者对于它的功能的研究也是难于开展。我们经过不断设计、验证和优化，先后测试了20多种环状RNA表达框架，优化出了特异性准确过表达环状RNA分子的载体。载体含有表达环状RNA的表达框，可以在细胞内通过RNA剪接形成环状的RNA分子；广大研究者可以将目标环状RNA的线性序列PCR扩增出来，直接连接到载体上生成对应环状RNA。
实验流程：
客户只需提供环状RNA的名称及其环化位点。言行生物将构建circRNA表达载体，进行慢病毒或腺病毒包装，感染目标细胞或者动物，提供稳定转染的细胞或动物。
