利用miRNA测序和芯片技术筛选到差异表达的miRNA后,往往需要开展miRNA的loss-of- function(功能缺失)研究,就需要沉默抑制miRNA的表达。
circRNA敲除思路主要针对circRNA backsplice junction处序列信息设计siRNA,对于内含子环化circRNA,也可对内含子区域设计相应siRNA进行干扰。Divergent primer验证circRNA敲除倍数。
敲除策略:
1. 外显子环化circRNA,针对backsplice junction位点前后序列设计siRNA;
2. 内含子环化circRNA,除针对backsplice junction位点前后序列设计siRNA序列以外,也可针对内含子区域序列设计siRNA。
3. 每个siRNA设计对应的对照,backsplice junction位点一端互补配对,另一端错配。
基于siRNA敲除策略
客户只需提供circRNA 名称、环化位点和目的细胞系名称,我们将提供circRNA siRNA载体构建,慢病毒包装,感染细胞,筛选出稳定细胞系等整套技术服务,提供稳定敲除细胞系、空质粒对照细胞系、QPCR验证和测序验证等结果。